产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Mouse RANKL protein

产品中文名称：重组小鼠NF-κB受体激活因子配体RANKL

规格：2 μg/10 μg/100 μg/1 mg

货号：EY-01X8640
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

标签:无标签

表达宿主:大肠杆菌

种属:小鼠

序列:氨基酸序列来源于： 小鼠RANKL (O35235)(Pro143-Asp316) 表达的蛋白片段。

活性:检测其与配体的结合能力，检测的实验类型为功能性ELISA。包被的 1 μg/mL(100μl/孔)小鼠sRANKL可以结合人OPG(C-Fc)，人OPG的EC50值为55 ng/mL。 OPG为55 ng/mL

蛋白长度：重组小鼠sRANKL由174个氨基酸（N-Met）组成，预测分子量为19 kDa。 在还原条件下，在SDS-PAGE中，小鼠sR动겸动

背景

RANKL是肿瘤坏死因子配体超家族成员11，也称为核因子kappa-B受体激活因子的配体，骨保护素配体，TNFSF11，RANKL，TRANCE，OPGL和CD254, 在多种细胞中表达，如成骨细胞，成纤维细胞，活化的T淋巴细胞，以及骨髓间质细胞。RANKL可以与诱骗受体OPG反应，并参与许多基础生物学过程，例如充当T细胞与树突状细胞之间相互作用的调节因子，调节T- 细胞依赖的免疫效应，并可以增强高钙血症的骨吸收。重要的是，RANKL可以增强树突状细胞刺激初始T细胞的增殖能力。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

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