实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠淋巴分离自组织；是机体的重要淋巴器官，其功能与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所。其还可以分泌激素及激素类物质，具内分泌机能的器官。位于胸腔前纵隔。胚胎后期及初生时，是一生中重量相对大的时期。随年龄增长，继续发育；此后逐渐退化，淋巴细胞减少，脂肪组织增多。的结构表面有结缔组织被膜，结缔组织伸入实质把分成许多不分隔的小叶。小叶周边为皮质，深部为髓质。皮质不包围髓质，相邻小叶髓质彼此衔接。皮质主要由淋巴细胞和上皮性网状细胞构成，胞质中有颗粒及泡状结构。网状细胞间有密集的淋巴细胞。的淋巴细胞又称为细胞，在皮质浅层细胞较大，为较原始的淋巴细胞。中层为中等大小的淋巴细胞，深层为小淋巴细胞。从浅层到深层为造血干细胞增殖分化为小淋巴细胞的过程。皮质内还有巨噬细胞，无淋巴小结。髓质中淋巴细胞少而稀疏，上皮性网状细胞多而显著。形态多样，胞质中有颗粒及泡状结构，为其分泌物，尚有散在的圆形的小体。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠淋巴采用机械研磨法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为1×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠淋巴经过检测，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和永利集团网址联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和永利集团网址联系，告知细胞的具体情况，以便永利集团网址的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠线粒体乙脱氢酶(ALDM)检测试剂盒 ，英文名： ALDM ELISA Kit

Pla vitamin D (VD) ELISA Kit 植物(VD)检测试剂盒

MouseEndostatin,ESELISAKit 小鼠内皮抑素(ES)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanAmylinELISAKit人胰淀素

细胞HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

ELISAKitER大鼠雌二醇受体

IL1R1重组小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 标签) Protein

酸激酶(PK)重组蛋白 Recombinant Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK)

GCSH重组人 GCSH 蛋白 Protein

CD59 Protein Human 重组人 CD59 蛋白

CD200 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD200 蛋白

酸激酶(PK)重组蛋白 Recombinant Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK)

CD59 Protein Human 重组人 CD59 蛋白

IL1R1重组小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD200 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD200 蛋白

GCSH重组人 GCSH 蛋白 Protein

小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)检测试剂盒

Humankeratansulfate,KSELISAKit 人硫酸角质素(KS)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Camelansforminggrowthfactorsβ2,TGFβ2检测试剂盒转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒规格：96T/48T

玉米叶片原生质细胞分离试剂盒5次

Mouseinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit小鼠诱导型合成酶(iNOS)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠胸腺淋巴细胞小鼠血小板反应蛋白检测试剂盒   小鼠血小板反应蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠血小板反应蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠血小板反应蛋白试剂盒、小鼠血小板反应蛋白检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠血红素氧合酶检测试剂盒   小鼠血红素氧合酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠血红素氧合酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠血红素氧合酶试剂盒、小鼠血红素氧合酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠血管性血友病因子检测试剂盒   小鼠血管性血友病因子试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠血管性血友病因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠血管性血友病因子试剂盒、小鼠血管性血友病因子检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠胰岛素原检测试剂盒   小鼠胰岛素原试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠胰岛素原试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠胰岛素原试剂盒、小鼠胰岛素原检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。