① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称：人肺成纤维细胞

英文名称：Human Lung Fibroblast Cells

组织来源：肺组织

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

人肺成纤维分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺器官的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

公司实验室分离的人肺成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人肺成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

脱氧核糖核酸酶I   100mg

DNaseI,frombovinepancreas

三0酸脱氧核苷酸混合溶液   10x0.5ml

dPMix,10mMeach(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)   100x0.5ml

小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human peptidylprolyl CIS ans isomerase (PPI) ELISA Kit 人肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)试剂盒

HumanvonWillebrandFactor,vWFELISAKit 人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanBcelldifferetiationfactor,BCDF试剂盒人B细胞分化因子(BCDF)试剂盒规格：96T/48T

植物源性饲料油菜籽(rapeseed)试剂盒20次

Humahrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit人纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)试剂盒规格：96T/48T

CNTNAP2重组小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

ENPP2重组人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

FGFR4 Protein Human 重组人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白

IL25 Protein Rat 重组大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 标签)

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

FGFR4 Protein Human 重组人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白

CNTNAP2重组小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

IL25 Protein Rat 重组大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 标签)

ENPP2重组人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

人肺成纤维细胞大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)试剂盒 ，英文名： IGFBP5 ELISA Kit

Mouse endostatin (ES) ELISA Kit 小鼠内皮抑素(ES)试剂盒

MouseThrombopoietin,TPOELISAkit 小鼠血小板生成素(TPO)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanCyclin-D2ELISAKit人细胞周期素D2

细胞AURORA-B激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitBMP-6大鼠骨形成蛋白6

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用